【摘要】  目的 了解多发性骨髓瘤(MM)病人血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达情况,并探讨沙利度胺联合化疗对MM病人血清IL-6、TNF-α的影响.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定30例正常人与79例MM病人血清IL-6、TNF-α的水平,并对MM病人不同临床分期,沙利度胺联合化疗前、后检测结果进行比较.结果 MM病人血清IL-6、TNF-α的水平明显高于正常对照组,差异有显著性(t=8.117、11.525,P<0.001).Ⅱ、Ⅲ期病人血清IL-6、TNF-α的表达水平明显高于Ⅰ期病人(F=4.233、10.273,q=3.012~6.294,P<0.05).55例治疗有效的MM病人血清IL-6、TNF-α的水平治疗后较治疗前明显下降(t=3.153、4.361,P<0.01);治疗无效的22例MM病人治疗前、后血清IL-6、TNF-α水平无明显差异(t=0.850、0.913,P>0.05).结论 血清IL-6、TNF-α的水平在MM病人中呈高表达,且与其临床分期有关;沙利度胺联合化疗可显著降低MM病人血清IL-6、TNF-α的水平;检测血清IL-6、TNF-α的水平可作为判断MM疗效及病情的辅助指标.
　　【关键词】  多发性骨髓瘤;白细胞介素6;肿瘤坏死因子α;沙利度胺;药物疗法,联合
　　[ABSTRACT]ObjectiveTo observe the serum levels of IL-6 and TNF-α in patients with multiple myeloma (MM), and explore the effects of thalidomide-combination chemotherapy on IL-6 and TNF-α. MethodsThe serum IL-6 and TNF-α in 79 MM patients and 30 normal controls were determined by ELISA, and the results of the patients in different stages as well as before and after therapy were compared.Results The concentrations of IL-6 and TNF-α in MM group were significantly higher than those in the control (t=8.117,11.525;P<0.001). The levels of IL-6 and TNF-α in stage Ⅲ and stage Ⅱpatients were higher than those of stageⅠ(F=4.233, 10.273;q=3.012-6.294;P<0.05). Of 55 patients responding well to the therapy, levels of IL-6 and TNF-α declined significantly compared with before treatment (t=3.153,4.361;P<0.01), for 22 patients who showed poor response to the therapy, the serum parameters did not reveal significant difference from that of before medication (t=0.850,0.913;P>0.05). Conclusion The concentrations of IL-6 and TNF-α are high in MM patients, and associated with the clinical stages of the disease. The thalidomide-combined chemotherapy can significantly reduce the serum levels of IL-6 and TNF-α, a detection of this two items can be used as an auxiliary index in estimating the therapeutic efficacy and the condition of patients with MM.
　　[KEY WORDS]Multiple myeloma; Interleukin-6; Tumor necrosis factor-alpha; Thalidomide; Drug therapy, combination
　　多发性骨髓瘤(MM)是造血系统常见恶性肿瘤之一,是以浆细胞恶性增生,分泌单克隆免疫球蛋白,并伴有正常免疫球蛋白减少以及广泛溶骨病变和(或)骨质疏松为特征的肿瘤.白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子与骨髓瘤细胞的生长和存活有关[1].本研究观察了79例MM病人通过沙利度胺联合VAD方案化疗前后血清IL-6、TNF-α的水平的变化,以探讨其在MM病程及预后判断中的意义.
　　1  对象与方法
　　1.1  研究对象
　　2003年12月~2008年6月在我院住院的初治MM病人79例,男43例,女36例;年龄35~81岁,中位年龄59.9岁.所有病人均经过外周血细胞计数、骨髓常规、骨骼X线、免疫球蛋白、尿轻链等指标的检测,诊断及分型符合张之南等[2]主编的《血液病诊断及疗效标准》;并按Durie-salmon(DS)分期法分期.其中IgG型38例,IgA型27例,轻链型8例,不分泌型6例;Ⅲ期45例,Ⅱ期25例,Ⅰ期9例.对照组为30例健康查体者,男18例,女12例;年龄36~76岁,中位年龄62岁.均排除肿瘤、心脑血管疾病、肝肾疾病、糖尿病,均无吸烟嗜好.
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 标本采集
　　空腹采集静脉血5 mL,分离血清,置于-20 ℃冰箱冻存待测.
　　1.2.2 血清IL-6、TNF-α水平检测
　　采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测.试剂盒由北京莱博生物科技有限公司提供.试剂配制、样本处理及测定步骤均严格按照试剂盒说明书操作.
　　1.3 治疗方法
　　79例初治MM病人均采用沙利度胺联合VAD方案化疗.沙利度胺口服起始量100~200 mg/d,根据病人耐受情况每2周增加剂量200 mg/d直至600 mg/d,每晚顿服或分早晚给药,并按此量维持治疗;同时联合标准VAD方案化疗,化疗4疗程结束后评价疗效.评价疗效分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、进步、无效(NR)[2].
　　1.4 统计学处理
　　数据处理采用PPMS 1.5统计软件[3],两组样本均数比较采用t检验,治疗前后比较采用配对t检验;多组数据间比较采用方差分析,组间两两比较采用q检验.
　　2 结果
　　2.1 两组血清IL-6、TNF-α水平检测
　　79例初诊MM病人血清 IL-6、TNF-α水平均明显高于正常对照组,差异均有显著性(t=8.117,11.525,P<0.001).见表1.表1  两组血清IL-6、TNF-α测定结果比较(略)
　　2.2 不同临床分期MM病人血清IL-6、TNF-α水平比较
　　Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM病人的血清IL-6、TNF-α水平均明显高于正常对照组,差异有显著性(F=7.033,13.172,q=2.910~11.211,P<0.05);Ⅱ、Ⅲ期MM病人血清IL-6、TNF-α水平明显高于Ⅰ期MM病人(F=4.233、10.273,q=3.012~6.294,P<0.05).见表2.表2  MM 病人不同临床分期血清IL-6、TNF-α水平比较(略)
　　2.3 MM病人治疗前、后血清IL-6、TNF-α水平的变化
　　经治疗79例MM病人中有14例达CR,25例PR,16例进步,24例NR(包括2例死亡病人),治疗有效率为69.62%.55例治疗有效组MM病人与24例治疗无效组在治疗前血清IL-6、TNF-α水平差异无显著性(t=0.860、1.020,P>0.05).治疗有效组治疗后血清IL-6、TNF-α水平与治疗前相比均明显下降,差异有显著意义(t=3.153、4.361,P<0.01);同时治疗后血清IL-6、TNF-α水平与正常对照组比较,差异无显著意义(t=1.985、1.869,P>0.05).22例治疗无效组病人治疗前、后血清IL-6、TNF-α水平比较差异均无显著性(t=0.850、0.913,P>0.05).见表3.表3  治疗有效与无效组MM病人治疗前、后血清IL-6、TNF-α水平比较(略)
　　3 讨论
　　MM是以骨髓克隆浆细胞增多为特征的B细胞恶性血液疾病.IL-6是具有多种效应的细胞因子,其既具有刺激肿瘤细胞生长的作用,又具有抗肿瘤作用.一方面,IL-6是骨髓瘤细胞生长的重要因子,其可通过激活Ras依赖的有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)途径促进骨髓瘤细胞的增殖[4],并抑制MM细胞的凋亡;另一方面IL-6可通过诱导IL-2受体的表达和刺激T淋巴细胞的增殖来增强细胞毒性T细胞的细胞毒作用,通过促进自然杀伤(NK)细胞的增殖、上调其表面黏附分子的表达及拮抗转化生长因子β的抑制作用来增强NK细胞的杀伤活性[5].所以,IL-6被认为是MM发病中重要细胞因子.本文检测结果显示,初治MM病人血清IL-6 水平较正常对照组明显升高;不同临床分期的MM病人血清IL-6水平差异也有显著性,临床分期越晚,血清IL-6水平越高.MM病人治疗有效组血清IL-6水平在治疗后明显下降,而治疗无效组则其水平无明显变化,这与文献报道的结果相符[6].DANKBAR等[7]认为MM病人过度表达的IL-6是由骨髓瘤细胞自分泌或骨髓中基质细胞旁分泌产生.提示IL-6增高与高肿瘤细胞负荷和病情活动有关;IL-6水平升高预示疾病预后不良.因此,MM病人血清IL-6水平变化可以作为观察病情、治疗反应及判断预后的辅助指标.
　　TNF-α是一种多活性的细胞因子,当患有感染、创伤、烧伤、自身免疫性、某些肿瘤尤其是晚期肿瘤等疾病时,血清水平可有不同程度的增高,且TNF-α参与机体的免疫、炎症等病理、生理过程的调节.本文结果显示,MM初诊病人血清TNF-α水平明显高于正常对照组,并与临床分期有关,治疗有效者血清TNF-α水平明显下降.MM病人血清TNF-α水平增高的机制尚未明了,有学者认为MM病人血清TNF-α水平增高与肿瘤B细胞以自分泌的方式产生TNF-α有关[8];DAVIES等[9]研究表明,MM的发生可能与TNF基因启动子多态性有关.这表明TNF-α可能参与了MM 的发生,监测MM病人血清TNF-α水平也可作为判断MM病人治疗效果的指标.
　　本文通过动态观察沙利度胺联合VAD方案治疗MM病人前、后血清IL-6、TNF-α水平的变化显示,治疗有效的MM病人体内IL-6、TNF-α水平明显降低,可能与以下因素有关:①沙利度胺通过减少骨髓基质细胞IL-6 mRNA的表达来减少IL-6的分泌,且在体内直接抑制骨髓瘤细胞的生长[10];②化疗药物直接杀伤骨髓瘤细胞,使骨髓瘤细胞数目减少,IL-6、TNF-α的分泌减少;③沙利度胺可以通过抑制骨髓瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的过度分泌,阻断IL-6与VEGF之间的旁分泌环[11].治疗有效者在缓解期血清IL-6、TNF-α水平仍略高于正常组,这说明缓解后体内仍可能残存部分恶性骨髓瘤细胞,这些残存的骨髓瘤细胞仍可释放IL-6、INF-α,同时残存的IL-6、INF-α可能是导致MM病人病情缓解后迅速复发的因素.因此,进一步研究MM病人血清IL-6、TNF-α水平有助于判断疾病的预后和转归,为调整治疗方案及预后判断提供有力的依据.
　　总之, MM目前仍被认为是一种难以治愈的疾病.本文结果显示,血清IL-6、TNF-α水平与MM发病及病情变化有关;沙利度胺联合VAD方案治疗有效MM病人血清IL-6、TNF-α水平可明显降低.因此,检测MM病人血清IL-6、TNF-α水平可有助于了解MM病人的病情及预后.
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