生川乌配伍全瓜蒌对小鼠急性毒性的影响
　　【摘要】目的: 观察生川乌与全瓜蒌配伍对小鼠急性毒性的影响.方法:140 只昆明小鼠随机分为生川乌单行(RA)及生川乌配伍全瓜蒌水浸剂(RAFT)组,每组70只.每组再随机分为6个给药组及空白对照组,每组10只.
　　各给药组小鼠分别灌胃给予不同剂量的受试药物( 以乌头剂量计算):4.7g/kg、6.7g/kg、9.6g/kg、13.7g/kg、19.6g/kg 和28.0g/kg.给药后观察14d,记录小鼠的中毒潜伏期、症状及死亡时间、恢复期及死亡数量,用改进寇氏公式计算LD50.结果: 生川乌与全瓜蒌配伍后中毒潜伏期、死亡时间较单行相应剂量组缩短,中毒恢复期延长(P <0.05).生川乌单行LD50 为9.26g/kg,95% 可信限为7.70g/kg-1.15g/kg; 生川乌配伍全瓜蒌LD50 为7.48g/kg,95% 可信限为6.40g/kg-8.74g/kg.结论: 生川乌配伍全瓜蒌对小鼠的急性毒性强于生川乌单行.
　　【关键词】生川乌; 全瓜蒌; 配伍; 急性毒性
　　中药的配伍应用是中医用药的主要形式,"十八反"中的反药对,属于配伍禁忌,既配伍之后毒性增强,反药对不可在同一药方中应用.然而,也有不少医家认为反药同用可起到相反相成、反抗夺积的效能,历代用之者亦不乏其人[1].
　　乌头与瓜蒌属于十八反之一,但文献对二药反与不反的问题历来争议颇多,有遵而避之者,亦有将二药同用且取得良效者,至今尚无定论[2-5].本研究以小鼠的LD50为指标,比较生川乌及生川乌配伍全瓜蒌的毒性,初步评价二者配伍与毒性的关系,为临床用药提供实验依据.
　　1 材料与方法
　　1.1 药材与实验动物
　　生川乌( 批号:090212): 产地四川,河北光明饮生有限公司汉草饮生厂生产,购自承德市利医中草药大厅; 全瓜蒌( 批号:080901): 产地河北,安国市光明饮片加工厂生产,购自承德市利医中草药大厅.清洁级昆明小鼠140 只,雌雄各半,体重18-20g,由河北省实验动物中心提供,许可证号:SCXK(冀)-1-003,合格证号:1008094.
　　1.2 药液制备
　　取生川乌50g,粉碎成米粒大小颗粒,加3 倍pH=5 的HCl 溶液,超声混合10min,浸泡12h,过滤;药渣再加3 倍pH=5 的HCl 溶液,浸泡6h,过滤,合并滤液.药液4000r/min 离心后,加适量NaHCO3 调pH=7.5,冷冻浓缩至50ml(1g/ml),即为生川乌单行水浸剂(RA).
　　另取生川乌与全瓜蒌各50g,按上述方法制备生川乌配伍全瓜蒌水浸剂(RAFT).
　　1.3 小鼠急性毒性试验
　　根据文献[6] 的方法进行预实验,确定剂量组、组间比例(k=0.7) 及各组剂量.
　　140 只小鼠随机分为生川乌单行组和生川乌配伍全瓜蒌组,每组70 只.每组小鼠再随机分为( 以乌头剂量计算)4.7g/kg、6.7g/kg、9.6g/kg、13.7g/kg、19.6g/kg、28.0g/kg 组及空白对照组,每组10 只,雌雄各半.小鼠禁食12h,自由饮水.分别灌胃给予不同剂量的药物,空白对照组灌胃等容积蒸馏水.给药后观察14d,记录小鼠中毒潜伏期、症状及死亡时间、恢复期及死亡率,并采用改进寇氏公式计算LD50.
　　1.4 统计分析
　　实验数据用均数± 标准差( ±s) 表示,采用SSPS 12.0 统计软件行t 检验,P <0.05 为差异有统计学意义.
　　2 结果
　　2.1 小鼠中毒反应及死亡率
　　RA 组及RAFT 组小鼠均于药后短时间内(2-10min) 出现恶心、呕吐(口吐白沫状液体)、咳嗽、四肢(尤其是后肢) 无法正常行动(运动神经麻痹)、强直性抽搐等中毒症状.死亡动物死前多出现数次跳跃、狂躁不安,继之出现肢体抽搐、震颤、瞳孔散大、遗尿等; 死后部分动物有两眼外凸表现.动物死亡后立即剖检见部分出现胸腔淤血,胃内大量残留药液,肠内少许残留药液.肝脏肉眼可见颜色较暗,其它脏器未见明显异常.未死亡动物中毒症状较轻,甚至未出现中毒症状.
　　未死亡动物中毒症状持续1-5h 后,逐渐恢复正常,未再出现后续死亡情况.生川乌水浸剂各剂量组小鼠的死亡只数分别为:0、3、6、8、9、10,生川乌配伍全瓜蒌水浸剂各剂量组小鼠的死亡只数分别为:0、5、8、9、10、10.空白对照组小鼠未出现中毒症状及死亡情况.
　　2.2 小鼠的中毒潜伏期及死亡时间
　　RAFT 4.7g/kg、6.7g/kg、28.0g/kg 组小鼠中毒潜伏期明显短于RA 相应剂量组,差异具有统计学意义(P <0.05).RAFT 6.7g/kg、9.6g/kg 组小鼠中毒恢复期明显长于RA 相应剂量组,差异具有统计学意义(P <0.05).RAFT 6.7g/kg、9.6g/kg、13.7g/kg、28.0g/kg 组小鼠死亡时间明显短于RA 相应剂量组,差异具有统计学意义(P <0.05).见附表.2.3 小鼠的LD50 生川乌水浸剂组小鼠的LD50 为9.26g/kg,95% 可信限为7.70-11.15g/kg; 生川乌配伍全瓜蒌水浸剂组小鼠的LD50 为7.48g/kg,95% 可信限为6.40-8.74g/kg.表明川乌配伍全瓜蒌较单纯应用川乌的毒性增强.
　　3 讨论乌头与瓜蒌为十八反中"半蒌贝蔹芨攻乌"的反药对之一,乌头为大毒之品,瓜蒌无毒.乌头与瓜蒌为何相反,古代文献语焉不详.近年来,学者们从物质基础、药效学、临床应用等方面进行了卓有成效的研究[7-10].但通过总结文献发现,因为受试药物、动物品种、实验环境及方法等各方面因素的差异,实验结果不尽一致,至今尚无定论.本研究以小鼠急性毒性为指标,比较生川乌与全瓜蒌按1:1 配伍和生川乌单行水浸剂的毒性,探讨二者配伍对川乌毒性的影响.
　　急性毒性是指动物一次或24h 内多次接受一定剂量的受试物,在一定时间内出现的毒性反应及死亡率,半数致死剂量(LD50) 是衡量药物急性毒性的主要指标.本研究按照《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则(第二稿)》的要求,考察了生川乌单行及生川乌全瓜蒌配伍应用的LD50,并考察了毒性反应发生的潜伏期、恢复期及与药物剂量的关系.结果显示: 配伍后中毒潜伏期、死亡时间较单行相应剂量组缩短、中毒恢复期延长; 生川乌单行的LD50 为9.26g/kg,95% 可信限为7.70g/kg-11.15g/kg; 生川乌配伍全瓜蒌水浸剂的LD50 为7.48g/kg,95% 可信限为6.40g/kg-8.74g/kg,说明生川乌与全瓜蒌配伍后较生川乌单行对小鼠的急性毒性增强.
　　现代研究证明,瓜蒌化学成分主要为三萜皂苷、有机酸及盐类、树脂、糖类和色素.宿树兰等[7] 的研究认为,瓜蒌中含有的酸性成分与乌头碱类二萜生物碱结合形成盐,有助于汤剂中毒性成分溶出增加,且由于生物碱盐的抗热破坏作用增强,稳定了毒性成分以盐的形式建立的平衡状态; 同时药液中富含的有机酸类成分与含氮有机碱、无机盐等碱性成分改变了煎液或体液的理化性质,使毒性成分在体内外的存在状态和代谢过程发生改变.因此,生川乌与全瓜蒌配伍合用水溶的过程中,使得药液中含有更多的双酯型乌头碱(川乌主要毒性成分),从而增加了配伍后的毒性,即二者配伍毒性增强的原因可能与瓜蒌本身含有的有机酸等物质促进了生川乌中生物碱的溶出有关.