【摘要】目的  建立卡比多巴原料药中有机溶剂残留的测定.方法  采用顶空进样毛细管气相色谱法,色谱柱为DB-624毛细管柱(25m×0.53mm,3.0μm),载气为氮气,用FID检测器测定卡比多巴原料药中乙醇和氯仿的残留量以及这两种溶剂中潜在杂质(二氯甲烷、四氯化碳和苯)的残留量.结果5种有机溶剂能够完全分离,质量浓度在考察范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率在80%~120%范围内,精密度的RSD均小于10%,定量限和检测线符合要求,该方法耐用性良好.结论 顶空气相色谱法快速、灵敏、准确,可用于样品中5种有机溶剂残留量的测定.
　　【关键词】顶空气相色谱法  有机溶剂残留  卡比多巴
　　在原料药的化学合成过程中,使用合适的有机溶剂是必要的,而这些有机溶剂在实际的生产和精制过程中无法被完全去除,因此对残留溶剂的合理控制是十分重要的.根据ICH 指南Q3C[1],残留溶剂可划分成三类.
　　第一类溶剂:应避免的溶剂,为人体致癌物、疑为人体致癌物或环境危害物.
　　第二类溶剂:应限制的溶剂,非遗传毒性动物致癌或可能导致其他不可逆毒性(如神经毒性或致畸性)的试剂.
　　第三类溶剂:低毒性溶剂,可根据实际情况使用.
　　卡比多巴为外周脱羧酶抑制剂,可抑制外周左旋多巴转化为多巴胺,与左旋多巴制成复方制剂,可减少左旋多巴的外周不良反应,提高药效,是目前帕金森病的一线药物,被誉为帕金森病药物治疗的"金标准"[2] [3].本产品在生产过程中使用了两种有机溶剂:a)氯仿  二类溶剂  在ICH Q3C中限定在60ppm[1];b)乙醇  三类溶剂  在ICH Q3C中限定在5000ppm[1]; c)生产过程中没有其他溶剂产生;d)没有其他催化剂产生其他残留溶剂.但是氯仿中可能有潜在的四氯化碳(在ICH Q3C中限定在4ppm[1])存在,乙醇中可能有潜在的苯(在ICH Q3C中限定在2ppm[1])存在,而这两种有机溶剂均为一类溶剂,应严格控制其残留.二氯甲烷(在ICH Q3C中限定在600ppm[1])则在卡比多巴起始物料的合成过程中使用.因此三种溶剂非工艺中使用,而是由其他物料带入,故在此研究中,只需考察他们的检测限及在终产品中的残留水平即可(低于ICH Q3C中规定的限度).
　　1  材料与方法
　　1.1仪器与试剂
　　Agilent 7890A 型气相色谱仪,Agilent 7674E型顶空进样器,FID 检测器,ChemStation工作站,卡比多巴原料药,乙醇,氯仿,四氯化碳,苯,二氯甲烷和硫酸(分析纯).
　　1.2 实验条件
　　色谱条件:
　　色谱柱:长度 25m,粒径 0.53mm,膜厚 3.0?m,固定相G43 (DB-624);流速:35cm/s (色谱柱流速) ;分流比:1:1;进样器温度:140℃:测器温度:260℃;柱温:采用程序升温,初始温度40℃,维持20min,然后以 20℃/min的速率升温至240℃,维持10min;检测器:FID;载气:氮气;
　　顶空条件:
　　平衡温度:80℃;平衡时间:45 min;定量环温度: 90℃;输送温度:100℃;加压时间:0.2min;进样时间:1.0min;进样量:1ml;定量环充满时间:0.2min;定量环平衡时间:0.2min.
　　2  结果与分析
　　2.1 标准图谱
　　配置以下浓度的标准溶液:乙醇 125ug/ml,二氯甲烷 15ug/ml,氯仿 1.5ug/ml,四氯化碳 1ug/ml,苯 0.5ug/ml.按以上条件进样,图谱如下:
　　图1 标准溶液气相色谱图
　　以上五种溶剂在设定条件下能完全分离(分离度大于2.0).
　　2.2 精密度考察
　　对照溶液6份,按上述方法测定,结果乙醇、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、苯的RSD分别为2.69%、3.82%、3.17%、2.06%、2.98%,符合精密度测定要求(RSD不大于10%).
　　2.3定量限考察
　　配制乙醇、氯仿的浓度分别为0.2ug/ml、0.15 ug/ml的溶液,依上述方法测定,乙醇和氯仿的定量限见表1.
　　表1 乙醇和氯仿的定量限
　　溶剂          浓度(ug/ml) S/N
　　乙醇          0.202                  10.5
　　三氯甲烷  0.154                  8.2
　　2.4 检测限考察
　　配制乙醇、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、苯的浓度分别为0.06ug/ml、0.045 ug/ml、0.015 ug/ml、0.1 ug/ml、0.005 ug/ml的溶液,依上述方法测定,五种溶剂的检测限限见表2.
　　表2 五种有机溶剂的检测限
　　溶剂          浓度(ug/ml) S/N
　　乙醇          0.061          4.9
　　氯仿          0.046          1.4
　　二氯甲烷  0.015          2.2
　　四氯化碳  0.1                  2.3
　　苯                  0.005          3.2
　　2.5 线性关系考察
　　精密移取乙醇和氯仿适量,用稀硫酸溶液逐级稀释成一系列浓度的溶液,依上述方法进样,以各溶剂的峰面积(Pa*S)为纵坐标,浓度(ug/ml)为横坐标,结果见表3:
　　表3  乙醇和氯仿的线性关系考察结果
　　溶剂 回归方程                       R2       线性范围(ug/ml)
　　乙醇 Y=5.6701x+7.905    0.9985     0.202-121.19(n=6)
　　氯仿 Y=27.4151x-8.4003   0.9919      0.154-7.12(n=6)
　　2.6 准确度考察
　　精密称取卡比多巴样品0.5g,共9份,置10ml顶空瓶中,分别精密加入乙醇、氯仿浓度相当于标准品溶液浓度10%、50%、100%的溶液(每个浓度3份)5ml,密封,溶解,依上述方法测定,根据峰面积计算回收率,结果乙醇和氯仿峰面积的平均回收率(n=9)分别为103.4%和94.5%.
　　2.7 方法耐用性考察
　　分别改变该方法的以下参数
　　平衡时间:40min,50min(正常条件:45min)
　　平衡温度:70℃,90℃(正常条件:80℃)
　　流速:30cm/s,40cm/s(正常条件:35cm/s)
　　柱温:35℃,45℃(正常条件:40℃)
　　色谱柱:两根不同批号的色谱柱(供应商:Agilent)
　　在各条件下,分别进样1次(标准溶液),考察各组分的分离度及拖尾因子.结果显示,适当改变参数,各溶剂峰之间的分离度和拖尾因子符合要求.
　　2.8 样品测定
　　精密称取卡比多巴样品0.5g,置10ml顶空瓶中,加5ml稀硫酸溶液,密封,溶解,依上述方法测定,以外标法测定各溶剂含量(6个批号产品,每批进样2针).结果显示,卡比多巴产品中乙醇的残留远远低于限度,氯仿、二氯甲烷、四氯化碳和苯均未检出.
　　3  讨论
　　目前测定原料药中的残留溶剂多采用顶空进样法,该方法操作简单可行.本研究中的测定方法简单快速、灵敏、准确、重现性好,为卡比多巴生产过程中使用的溶剂乙醇、氯仿以及物料中带入的溶剂二氯甲烷、四氯化碳和苯提供了可靠的方法.试验过程中,起初选择了水为溶剂,但是样品不能完全溶解(卡比多巴微溶于水),会导致测定结果偏小,而盐酸有挥发性,故选择了稀硫酸为溶剂.
　　参考文献
　　[1] ICH HARMONISED TRIPARTITE GUIDELINE,IMPURITIES: GUIDELINE FOR RESIDUAL SOLVENTS Q3C (R3)
　　[2] 蔡康民(上海第二医科大学附属瑞金医院卢湾分院神经内科),卡比多巴-左旋多巴治疗帕金森病26例疗效观察,《蚌埠医学院学报》 2001年第26卷第4期,335-336页;
　　[3] 沈崇礼,吴晓红(江苏省淮阴市第一人民医院眼科),左旋多巴和卡比多巴治疗儿童弱视,眼科新进展 1999年第4期第19卷.