【摘要】目的:探讨血小板测定过程中影响检测结果的因素.方法:血细胞分析仪分析后,又对其中的血小板直方图异常、血小板测定值与直方图不符、MCV(平均红细胞体积)< 70f1、血小板计数结果与临床诊断不符的约合三千余例进行目视显微镜计数或采用其它方法重新采血计数.结果:血小板抗凝剂,小红细胞数量、试剂的质量、抗凝剂的种类及比例、标本放置时间、血小板体积异常等均可影响正确计数血小板数量.结论:血小板计数影响因素较多,应结合直方图进行判断,
　　必要时进行显微镜计数或重新采血.
　　【关键词】血小板 影响因素 解决方法
　　血小板(PLT)检测是研究止血与凝血障碍的重要指标之一,也是其他血小板参数可靠性的基础,其检测结果的可靠性至关重要.血小板由于体积小,特别是容易发生粘附,聚集和变性破坏,故常难以计数.血液细胞分析仪的普及,大大提高了工作效益,但对血小板检测,其结果往往不很稳定.使用血细胞分析仪检测血小板的影响因素很多,现探讨如下.
　　1 材料与方法
　　1.1 仪器 血细胞分析仪(BC-3000 PLUS),为深圳迈瑞公司产品.
　　1.2 试剂 全部配套试剂和质控液.
　　1.3 标本 2008 年5 月至2009 年5 月之间,我科所检测的病房和门诊的4 万余名患者的全血和预稀释标本.
　　1.4 检测方法
　　对标本用血细胞分析仪进行分析,并对其中三千余例标本同时进行目视显微镜计数,这三千余例标本基本可分为三类:(一)血小板直方图异常(二)血小板测定值与直方图不符(三)MCV(平均红细胞体积)< 70fl
　　2 误差原因分析
　　2.1 采血过程中因操作缓慢,穿刺不顺,组织液混入,混匀不及时等均可促成血小板(PLT)聚集,导致计数结果偏低,在PLT 直方图上提示有大颗粒存在,PLT 聚集是影响PLT 技数的主要原因,结果极不可靠,对此种情况须重新采血进行了显微镜镜检,并与正常图形进行对比.
　　2.2 由于血小板(P L T)和红细胞(R B C)是在同一个检测系统中通过颗粒大小来加以鉴别的,大量小红细胞的存在可引起PLT 上限区域的改变.在MC V 小于70f l 时,仪器往往提示上限区域有干扰,红细胞直方图上显示有小红细胞存在.研究发现,MC V 越小,小红细胞数量越多,被记录的PLT 数就越多,血小板计数值就越高.实际工作中采用手工法可获得可靠的血小板计数值.[1]
　　2.3 血细胞的检测结果,尤其是血小板(P L T)的结果,直接反映试剂的质量.原则上强调使用与仪器检测原理相匹配的试剂.溶血剂是血细胞分析仪试剂中的主要试剂,能将红细胞溶解,并能使白细胞的体积发生规律性变化.理论上讲PLT 计数时的脉冲大小只与稀释液的性能和仪器的设置有关,与溶血剂的性能无关.但实际工作发现,若溶血不完全,由于红细胞碎片冲洗不彻底将引起PLT 假性增高.特别注意的是,试剂应避免污染,否则,杂质微粒会使本底增高,导致最后计数结果偏高.
　　2.4 抗凝剂的种类对检测结果影响较大,国际化学标准委员会推荐EDTA 二钾抗凝.另外,血液和抗凝剂的比例也会影响检测质量.血液比例过高时,由于抗凝剂相对不足,血浆中出现血块的可能性增加,使测定结果出现假性减低,如果血少,抗凝剂的浓度增高,血小板会肿胀、崩解、产生正常PLT 大小的碎片,从而使血小板的测定结果出现不应有的假性增高.
　　2.5 标本放置时间太长(室温不能超过2h)易产生巨大血小板.血小板易吸附在中性粒细胞及淋巴细胞膜周围,还可存在于血浆中极微小的纤维蛋白凝块中,形成巨大血小板,使血小板计数偏低.所以,全血标本需不断混匀,2h 内完成测定.[2]
　　2.6 测定中放置血液标本的容器需要干净,一般市售的真空采血管未发现内部有杂质,故不做讨论.而在预稀释模式测定时,所用试管发现存在杂质,根据C o u l t e r 原理,仪器只识别颗粒大小而不能识别颗粒的性质,因此此类杂质中2 ~ 30f l 被计入血小板测定中,使测定结果出现假性增高.
　　2.7 E D T A 盐可引起血小板聚集,出现假性血小板减少,其发生率为0.07% -1% [3].其原因是个别病人血小板可在E D T A 螯合剂中于10s 内聚集,而血细胞分析仪会错误地将凝集的血小板作为红细胞或白细胞计数所致.此种减低需用枸橼酸钠抗凝剂重新采血[4] 或在2m g /mlEDTA-K2 抗凝剂血内加入5mg/ml 丁胺卡那霉素[5] 或采集末梢血用预稀释方法计数.
　　综上所述,血小板计数过程中影响因素很多,此外还有一些因素,有待进一步探讨.由此可见,要想获得准确的计数结果,应结合直方图进行判断,必要时进行显微镜计数或重新采血.
　　参考文献
　　[1] 廖忠. 血细胞分析仪测定血小板的影响因素分析. 广东医学院学报,2005,23(5):611-619.
　　[2] 齐天蕊. 血小板计数误差与标本放置时间关系的探讨. 医学文选,2003,22(4):532.
　　[3] Yamaguchi M,Mayumi M, Kasuya T A Patient with EDTA dependentpseudothrombodytopenia who underwent clipping surgery for a rupturedaneurysm[J].Excerpta Med Section 25.Hematol,1998,68(2):93.
　　[4] 丛玉隆, 主编. 血液学体液学检验与临床释疑. 北京: 人民军医出版社,2004,163.
　　[5] 巫小莉, 周小棉等.EDTA 抗凝剂依赖性假性血小板减少症血小板计数的研究. 实用医学杂志,2007,23(4):578-580.