奥扎格雷钠脂质体制备工艺研究
　　奥扎格雷钠(ozagrel hydroehloride)是一种选择性、强力血栓素合成酶特异性抑制剂,能抑制血栓素A2(TXA2)的生成,具抗血小板聚集和扩张血管的作用,临床上主要用于急性血栓性脑梗死和脑梗死所伴随的运动障碍,改善蛛网膜下腔出血手术后的脑血管痉挛收缩和并发脑缺血症状[1].但是该药含有双键,在贮存中容易氧化变质,失去药效,使用期短.据此,本研究将奥扎格雷钠制备成脂质体,增加了药物的稳定性,延长了保质期.
　　1 材料与仪器
　　1.1 试药:奥扎格雷钠原料药(西安仁达生物科技有限公司,批号为20110714);奥扎格雷钠对照品(上海信然标准品对照品专卖,含量:99.8%);胆固醇(河南利伟生物药业股份有限公司);卵磷脂(河南利伟生物药业股份有限公司);维生素E(武汉远城科技发展有限公司);三羟甲基氨基甲烷(Tris,北京鼎国生物技术有限责任公司),其余试剂为市场销售分析纯.
　　1.2 仪器:1200系列高效液相色谱系统(美国Agilent公司),包括G1315BDAD检测器,G1311A 四元泵,G1329A标准型自动进样器,G1316A柱温箱;ZFQ 3型旋转蒸发仪(天津市第一玻工厂);CX 250超声波清洗器(北京医疗设备工厂).
　　2 试验方法
　　2.1 建立奥扎格雷钠含量的测定方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定奥扎格雷钠和脂质体中奥扎格雷钠的含量,将脂质体冻干粉针加入纯净水配制胶体溶液,精密移取适量,甲醇破乳、定容.色谱的条件为:色谱柱Agilent C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)为流动相;柱温25℃;检测波长274nm;流速1mL/min;进样量20μL.在此色谱条件下,奥扎格雷对照品及奥扎格雷钠脂质体色谱图见图1~3.
　　以奥扎格雷钠的量(μg)为横坐标,以奥扎格雷钠的峰面积为纵坐标,回归方程为:A=12.379C+6.335 8,r=0.999 7.结果表明,奥扎格雷钠在10~100μg/mL范围内与峰面积呈现出良好的线性关系.
　　图1 奥扎格雷钠对照品图2 奥扎格雷钠脂质体图3 空白脂质体2.2 注射奥扎格雷钠脂质体的制备:通过前期大量预试验及单因素的考察确定最优制备工艺条件,按最优处方量精密称取适量的卵磷脂、胆固醇、维生素E、奥扎格雷钠于250mL具塞锥形瓶中,加入适量乙醇超声充分溶解脂质,采用旋转减压蒸发除去乙醇,在瓶壁上形成一层脂质薄膜,抽真空20min,加入5mL Tris缓冲溶液,40℃水浴振荡水化2h,再超声至形成水性悬浊液.
　　2.3 外观性状:注射用奥扎格雷钠脂质体外观为白色块状,色泽均一.取用一瓶奥扎格雷钠冻干脂质体,加入5mL水,室温环境摇匀,即可获得半透明的白色乳状胶体.
　　2.4 测定奥扎格雷钠脂质体的载药量及包封率:将制得的奥扎格雷钠脂质体全部转移至20mL量瓶中,用Tris缓冲溶液溶解定容,轻摇使得混合均匀.精密量取5.0mL于离心管中,在离心机上以3 000r/min、5min/次的条件下离心3次,弃去上清液.精密移取色谱纯甲醇5.0mL溶解剩余沉淀,取20μL进样,其浓度计算方法为将所得峰面积代入标准曲线,则包封率=(滤液-下清液)/过滤膜前脂体混悬液]×100%.
　　2.5 体外释放度对释放行为的影响:将透析袋预处理后,置于释放介质中过夜浸泡.取冻干脂质体采用蒸馏水复溶后,采用5%的葡萄糖注射液稀释,直至溶液的质量浓度达0.05mg/mL.将1mL置于透析袋中,扎紧两端,后绑在溶出仪小浆上,置于小杯,该小杯内盛放100mL已配制好的Tris缓冲溶液,然后进行体外释放实验,介质温度为(37.0±0.5)℃,转速100r/min.根据提前设定好的时间间隔取5mL释放介质进行浓度的测定,并补充相同温度的释放介质5mL,HPLC测定药物在释放介质中的浓度,并计算出药物累积释放百分比.
　　3 试验结果
　　3.1 测定奥扎格雷钠脂质体包封率和载药量:试验中显示脂质体的粒径会随药物量的增加而增大,过多的包封药物会因其超过膜的饱和限度导致药物渗漏,包封率降低.奥扎格雷钠冻干脂质体重建后其包封率为(89.76±0.05)%;总脂质按照投药量来计算,其载药量为(8.700±0.010)%.
　　3.2 脂质体的形态学考察:通过透射电镜对重建后的脂质体进行观察,观察结果显示其大小与粒径测定仪的检测结果接近,并且多数粒子呈圆形小球或者近球形,粒径较为均匀,相互之间无聚集现象,并且可以看到非常清晰的螺旋结构.
　　3.3 奥扎格雷钠脂质体体外释放度:在体外模拟试验时,脂质体与奥扎格雷钠注射液的体外释放行为相近,在12h以内,释放量随着释放时间延长而增加,采用方程拟合,发现拟合释放度数据与Higuchi方程相符,释放方程表达如下,其中脂质体释放方程式为:Q=31.42 t1/2+1.182,r=0.993 8;注射液释放方程式为:Q=32.41t1/2-3.22,r=0.995 9.而在12h以后,无论是脂质体还是注射液,释放均达到一定的平台期,释放量不再随着时间变化而变化.